高效液相色谱柱大致分五类:、高效反相液相色谱柱 C18代表高效反相液相色谱柱直被描述药物发现、开发、方法验证(validation)心脏! 高效反相液相色谱柱也极其广泛应用药物代谢及动力学、生命科学、医疗健康、生物分析检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析、军事、国土安全等领域! 高效反相液相色谱制备柱也重要分离纯化技术之! 无论过去现和预见未来, 球形B型硅胶(5um 或 3um)材料骨架高效反相液相色谱柱实际应用永远占有统治地位!常规HPLC方法开发几乎总从C18作出发点反相色谱占了80%上应用 过去数十年来, 无数努力集注于: 1) 改善硅胶品质, 优化键合化学; 2)开发新颖材料骨架替代硅胶十多年前, 使用有机硅材料取代无机硅材料作起始原料生产球形硅胶代表划时代革命! 生产球形硅胶命名B型球形硅胶无机A型硅胶重金属含量高, 硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等导致许多碱性化合物回收率低球形B型硅胶重金属含量低, 非常大程度上消除了A型无机硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等问题用B型球形硅胶合成高效液相色谱填料, 导致高效液相色谱柱产品质量有质飞跃!而另方面基于客户大量反馈和我们对几乎所有色谱厂商产品评估, 我们相信键合化学问题没有获得好解决具体体现:
(1) 纯粹反相机理键合相例C18和C8市场上仍单功能三功能和聚合物键合相"鱼目混杂" (2) 键合相封端问题没有获得好解决, 直困扰色谱领域大问题! 迄今止全部尝试只获得有限成功
(3) 极性嵌入式(Polar embedded)键合相
极性嵌入式(Polar embedded)键合相C18高效反相液相色谱"卫星群"重要产品, C18和C8键合相重要补充
极性嵌入式(Polar embedded)键合相起源于Supelco ABZSupelco ABZ键合方法用aminopropyl键合相和长链羧酸缩合反应形成C16酰胺 市场上极性嵌入式(Polar embedded)键合相群主要问题? 极性嵌入式键合相和所谓水相C18主要问题键合相泄漏, 键合相稳定等两者之间内差异: 极性嵌入式键合相键合相泄漏和键合相稳定等问题能够获得好解决, 使用极性硅烷试剂封端所谓水相C18键合相键合相泄漏和键合相稳定等问题逆转 类似C18链长度硅烷试剂嵌入极性酰胺或酰酯, 使得键合相亲水, 100%水相条件下稳定按照类似C18键合化学, 键合覆盖率低, 键合相稳定 Chrom-Matrix InnovationTM PEG键合相非常极性产品, 测试结表明: PEG键合相非常稳定, LC-MS测试没有检测泄漏成功和我们胶体与界面科学领域长期经验帮助我们成功开发了新型催化条件下新键合化学加上超临界流体技术封端, Chrom-Matrix InnovationTM 极性酰胺或酰酯键合相比市场上极性嵌入式(Polar embedded)键合相群稳定得多色谱柱产品质量和寿命有质飞跃! 即使样, LC-MS测试显示: Chrom-Matrix InnovationTM 极性酰胺或酰酯键合相仍有非常低泄漏(4) 无泄漏低孔和高比表面积C18键合相等小分子化合物分离纯化终端保证!制备型高效反相液相色谱柱, 制备型高效正相液相色谱柱, 制备型高效离子交换色谱柱和对应闪光色谱(flash chromatograpy) 小分子化合物分离纯化重要终端保证!市场上大多数色谱产品和闪光色谱(flash chromatograpy)键合相有明显泄漏尽管泄漏紫外见检测器看见, LC-MS信号非常明显! 重要泄漏硅烷实实洗脱顾客终端纯化产品, 而且没有考虑内
Chrom-Matrix公司成功地解决了上述所有问题! InnovationTM所有反相高效液相色谱产品都使用B型球形硅胶合成, 使用优化性化合成工艺, 使用超临界流体封端, 使用LC-MS/MS和表面电荷滴定等多种独特技术配合多种色谱测试保证产品品质和批次重现性其大部分产品LC-MS/MS测试无泄漏, 极性嵌入式(Polar embedded)键合相非常低泄漏二、高效正相液相色谱柱 正相液相色谱早色谱模式直现, 合成通过硅胶柱做进步纯化仍有机化学家日常工作重要组成部分理论上, 几乎所有溶于正己烷乙酸乙酯或异丙醇有机化合物都用高效正相液相色谱分析实际应用高效正相液相色谱应用比高效反相色谱少得多因正己烷, 乙酸乙酯没有像水甲醇或乙腈样受欢迎此外, A型硅胶正相液相色谱给客户惯性思维: 高效正相液相色谱平衡时间长事实上, 高效正相液相色谱制备规模色谱纯化直发挥了重要作用因:(1) 高效正相液相色谱比高效反相色谱柱压低得多(2) 高效正相液相色谱用溶剂例正己烷, 乙酸乙酯容易通过旋转蒸发除去(3) 吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有机化合物B型球形硅胶, Diol和PEG正相液相色谱柱上峰形此外, 管制备规模或分析测试,(1) 结构异构体分离分析必须使用正相液相色谱或超临界流体色谱(2) 环境腐殖酸结构鉴定必须使用甲基化或硅烷化消除小分子聚集, 使用正相液相色谱或超临界流体色谱种小分子聚集自现象定相当广泛PEG正相液相色谱键合相等让客户重新评估高效正相液相色谱价值三、高效亲水液相色谱柱 高效亲水液相色谱介于正相和反相高效液相色谱之间运作模式模式早来自NH2色谱柱糖分析应用此之逐步Diol, 硅胶和亲水性高分子键合相找了些有价值应用近年来高效亲水液相色谱成比较流行色谱运作模式, 主要因亲水性化合物有良好保留和高效亲水液相色谱LC-MS/MS应用尽管此迄今止没有权威论文, 评论和教科书揭示了高效亲水液相色谱真正价值和局限性近年来我们帮助客户采用高效亲水液相色谱运作模式成功地开发和验证了数百计HPLC和LC-MS/MS应用我们总结出:(1) 高效亲水液相色谱LC-MS/MS应用第选择请参阅我们LC-MS/MS产品手册应用案例(2) 除了InnovationTM TX多功能色谱柱, 所有亲水液相色谱仅用于分析而制备规模分离(3) 高效亲水液相色谱流动相A乙腈(pH值用少量甲酸或其调节), 流动相B水(pH值用少量甲酸或其调节)化合物洗脱秩序类似于正相液相色谱, 疏水性化合物首先洗脱, 亲水化合物流动相A般使用甲醇或丙酮或其有机溶剂(4) 进样体积太大会导致些峰值扭曲或分裂柱承载能力通常非常小(5) InnovationTM TX, HP Amide, Silica三种高效亲水液相色谱覆盖99 ％上应用, NH2色谱柱用于简单糖分析应用(6) 除了InnovationTM TX多功能色谱柱, 所有亲水高效液相色谱柱柱效正相和反相高效液相色谱四、高效强阳离子交换液相色谱柱 离子交换液相色谱生物分离常见有用种色谱模式另方面小分子分离分析极少使用高效离子交换液相色谱因:(1) 新颖反相和多功能键合相例InnovationTM Polar-Embedded Stable Amide和TX连续出现, 大程度上补偿了常规C18键合相缺点 C18, C8键合相也有重大进展高效亲水液相色谱柱也覆盖了许多分析应用(2) 相比之下, 硅胶基质高效离子交换键合相近几十年来产品质量没有取得质突破硅胶基质高效离子交换键合相柱寿命普遍短, 疏水相互作用明显(3) 聚合物基质高效离子交换键合相生物分析上面应用比较广泛, 其柱效过低表面积太小对小分子分离分析难有吸引力 科学发明往往来自现实世界挑战! 对海洋毒素, 微生物代谢产物和天植物(包括草药)有效成分分离纯化过程, 我们深深感高质量硅胶基质高效离子交换键合相必少! 因此我们开发了硅胶基质SCX, WCX, DEAE和SAX高效离子交换键合相五、InnovationTM高效多功能液相色谱柱我们介绍四种高效多功能液相色谱柱:(1) InnovationTMTX毒品分析HPLC柱 InnovationTM TX毒品分析HPLC柱实际应用有价值种色谱柱由于其毒品分析上出色表现, DEA专家称毒品分析HPLC柱InnovationTM TX多功能色谱柱, 具有反相, 弱阳离子离子交换, 亲水等作用, 能够使用100%水相或100%有机相由于弱阳离子离子交换机理, InnovationTM TX对碱性化合物分离效所有色谱柱好对碱性化合物有完美峰形绝对柱效和反相色谱分析柱相同甚至优于反相, 远胜传统亲水色谱分析柱(2) InnovationTM DNPH HPLC柱 InnovationTM DNPH HPLC柱主要用于环境醛和酮DNPH衍生物分析特定DNPH衍生物分析应用, 任何其色谱柱没有优越选择性(3) InnovationTM PAH HPLC柱 (4) 血浆血清直接进样InnovationTM PEG色谱柱 限制进入键合相(Restricted access media)早由Merck公司发明典型方法首先制造Diol键合相, 通过酰酯或酰胺反应嵌入疏水链硅胶外表面酰酯或酰胺链使用酶切断开酶能扩散内表面由此外表面亲水, 内表面疏水血浆血清, 尿样直接进样蛋白质等生物流体通过亲水外表面时没有保留, 小分子化合物扩散内表面通过反相保留洗脱限制进入键合相(Restricted access media)学术领域比较欢迎, 随着固相萃取产品发展, 工业领域应用相当少 我们发现, 血浆血清, 尿样直接进样限制进入键合(Restricted access media), 尤其InnovationTM PEG色谱柱药物代谢领域具有独特价值药物代谢研究, 尤其全盲条件下早期药物代谢研究, 追求绝对回收率! 种药物代谢之, 打破成许多小分子化合物全盲条件下能使用固相萃取回收全部小分子代谢产物理想方法, 血浆血清, 尿样直接进样, 每毫升收集液使用14C同位素检测, 建立明确代谢概况 InnovationTM PEG色谱柱种多功能色谱柱好正相色谱柱! 同时使用乙醇取代储存溶剂, 能够被用来作反相让血浆血清, 尿样直接进样